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解決方案
抗體如何選擇
點擊次數(shù)：2332 日期：2014/3/12 13:28:46
檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，為縮小抗體的選擇范圍選中合適的抗體，需要考慮如下幾種因素：
一、分析試驗的應用類型
一般抗體說明書都列出該抗體經(jīng)試驗驗證過適用于何種分析類型，如：可以應用于WB IHC ICC ELASA 分析等，如果抗體說明書沒有提及的應用類型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應用類型，而僅是說明尚未經(jīng)過此種分析試驗驗證，如果抗體不適用 某些分析試驗，則會在抗體說明書上標注出來不適于某分析試驗。
二、 樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)
了解樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)有助于選擇最合適的抗體，至少兩方面因素需要考慮：
1. 待測樣本蛋白的結(jié)構(gòu)域：抗體是由各種不同免疫原免疫宿主而制備得來，其中的免疫原包括：全長蛋白、蛋白片斷、多肽、全有機體（如：細菌）或細胞，抗體說明書一般都有免疫原的描述，如果打算檢測的是蛋白片斷或一種特殊的同型物或蛋白全長的某一區(qū)域，則必須選擇用含此片段域的免疫原制備出的抗體。如果打算用FACS 流式檢測活細胞的表面蛋白，則需要選擇含該表面蛋白的胞外域來免疫制備的抗體。
2. 樣本的提取或處理過程：某些抗體要求樣本經(jīng)過某些特殊處理，例如：許多抗體只識別還原和變性的、表位已暴露不受二級四級結(jié)構(gòu)阻礙的蛋白樣本，另一方面，某些抗體僅識別天然折疊狀態(tài)的蛋白。當選擇免疫組化的抗體時，應注意某些抗體只識別未固定的冷凍的組織，而另一些抗體則適用于無需抗原修復解交聯(lián)步聚的甲醛固定石蠟包埋的組織，這些都會在抗體說明書上應用部分標示出來。
三、樣本的物種
應選擇物種相同或有交叉反應的抗體，抗體可能與不同物種的同種靶蛋白有交叉反應，因其氨基酸序列同源性較高，如果樣本的種類未列入抗體說明書上的交叉反應種屬表中，并不意味著該抗體不適用于檢測該物種的蛋白，而只是表示該物種尚未用此抗體檢測驗證過，應通過序列比對的方法來預測交叉反應，可應用Expasy 和 NCBI BLAST 來進行不同物種蛋白同源性比對。
四、一抗宿主物種的選擇
一般說來，在使用偶聯(lián)二抗結(jié)合無偶聯(lián)物的一抗時，一抗宿主動物的物種選擇較為重要，對于免疫組化而言，盡可能選擇與樣本不同種系物種的一抗，從而避免二抗與樣本內(nèi)源性免疫球蛋白產(chǎn)生交叉反應，例如：檢測小鼠樣本蛋白，則不應選擇小鼠或大鼠源的 一抗，最好選兔源的一抗，則二抗則可選擇偶聯(lián)了檢測分子（酶、熒光素、生物素等）的抗兔IgG。
如果選擇有偶聯(lián)物的一抗則不適用上述情況，除免疫組化外的其它對不含內(nèi)源性免疫球蛋白樣本的檢測方法，則抗體宿主物種的影響不大，如對不含IgG 的細胞裂解物樣本的western blotting檢測，盡管如此，含有血清的組織裂解物和組織培養(yǎng)上清中含有免疫球蛋白，還原變性樣本中含IgG，在western blot 檢測中則結(jié)合出現(xiàn)IgG 分子50 and 25 kDa 的重鏈和輕鏈條帶。
抗體的品質(zhì)高低最終還是需要通過實驗結(jié)果來呈現(xiàn)的，但是在選擇抗體之前我們并無法準確判斷抗體的效果如何。無論什么品牌的，無論進口還是國產(chǎn)的，都會有用得不錯的產(chǎn)品，也都會有做不出來的產(chǎn)品�？贵w屬于異質(zhì)化產(chǎn)品，不同品牌之間，甚至同一品牌的不同產(chǎn)品之間，抗體品質(zhì)差異都較為明顯，而且沒有統(tǒng)一的衡量標準。這是抗體選擇中最難的一個問題。很多人習慣于根據(jù)實驗室傳統(tǒng)意識或參考文獻上使用的產(chǎn)品進行選擇，但是因為不同批次間的抗體效果也是有差異的，所以并不能完全確保正確選擇。在這種情況下，抗體的售后就尤為重要，遇到抗體品質(zhì)障礙時，能夠確保有效地解決問題，不至于影響實驗的進展�，F(xiàn)在有部分品牌可以提供免費的抗體小樣的，無疑對這個問題是一個很好的解決方案。先確定抗體是否適合自己的實驗，可以避免因為抗體質(zhì)量投訴耽誤實驗安排。
在價格方面，需要謹記，最貴的不一定就是最好的，最適合你的實驗的才是最好的。花很多錢買到很貴的抗體，再花上很長的時間去投訴的情況并不少見。只買對的，不買貴的。在選擇價格的時候還要注意規(guī)格大小、抗體濃度、效價范圍等，要綜合考慮。在規(guī)格方面，根據(jù)最終可以稀釋成的工作液的量的來衡量更為準確。很多老品牌提供的抗體產(chǎn)品基本都是以大包裝為主，就單個課題的實驗而言，過大的包裝有時會造成很大的浪費。目前Proteintech、Bioworld、Cell Signal等品牌都相繼推出小包裝的抗體，這在一定程度上給選擇者更大的選擇自由度，可以根據(jù)使用產(chǎn)品的效價，計算出自己實際需要的抗體量，做到精確定量采購。
一、分析試驗的應用類型
一般抗體說明書都列出該抗體經(jīng)試驗驗證過適用于何種分析類型，如：可以應用于WB IHC ICC ELASA 分析等，如果抗體說明書沒有提及的應用類型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應用類型，而僅是說明尚未經(jīng)過此種分析試驗驗證，如果抗體不適用 某些分析試驗，則會在抗體說明書上標注出來不適于某分析試驗。
二、 樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)
了解樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)有助于選擇最合適的抗體，至少兩方面因素需要考慮：
1. 待測樣本蛋白的結(jié)構(gòu)域：抗體是由各種不同免疫原免疫宿主而制備得來，其中的免疫原包括：全長蛋白、蛋白片斷、多肽、全有機體（如：細菌）或細胞，抗體說明書一般都有免疫原的描述，如果打算檢測的是蛋白片斷或一種特殊的同型物或蛋白全長的某一區(qū)域，則必須選擇用含此片段域的免疫原制備出的抗體。如果打算用FACS 流式檢測活細胞的表面蛋白，則需要選擇含該表面蛋白的胞外域來免疫制備的抗體。
2. 樣本的提取或處理過程：某些抗體要求樣本經(jīng)過某些特殊處理，例如：許多抗體只識別還原和變性的、表位已暴露不受二級四級結(jié)構(gòu)阻礙的蛋白樣本，另一方面，某些抗體僅識別天然折疊狀態(tài)的蛋白。當選擇免疫組化的抗體時，應注意某些抗體只識別未固定的冷凍的組織，而另一些抗體則適用于無需抗原修復解交聯(lián)步聚的甲醛固定石蠟包埋的組織，這些都會在抗體說明書上應用部分標示出來。
三、樣本的物種
應選擇物種相同或有交叉反應的抗體，抗體可能與不同物種的同種靶蛋白有交叉反應，因其氨基酸序列同源性較高，如果樣本的種類未列入抗體說明書上的交叉反應種屬表中，并不意味著該抗體不適用于檢測該物種的蛋白，而只是表示該物種尚未用此抗體檢測驗證過，應通過序列比對的方法來預測交叉反應，可應用Expasy 和 NCBI BLAST 來進行不同物種蛋白同源性比對。
四、一抗宿主物種的選擇
一般說來，在使用偶聯(lián)二抗結(jié)合無偶聯(lián)物的一抗時，一抗宿主動物的物種選擇較為重要，對于免疫組化而言，盡可能選擇與樣本不同種系物種的一抗，從而避免二抗與樣本內(nèi)源性免疫球蛋白產(chǎn)生交叉反應，例如：檢測小鼠樣本蛋白，則不應選擇小鼠或大鼠源的 一抗，最好選兔源的一抗，則二抗則可選擇偶聯(lián)了檢測分子（酶、熒光素、生物素等）的抗兔IgG。
如果選擇有偶聯(lián)物的一抗則不適用上述情況，除免疫組化外的其它對不含內(nèi)源性免疫球蛋白樣本的檢測方法，則抗體宿主物種的影響不大，如對不含IgG 的細胞裂解物樣本的western blotting檢測，盡管如此，含有血清的組織裂解物和組織培養(yǎng)上清中含有免疫球蛋白，還原變性樣本中含IgG，在western blot 檢測中則結(jié)合出現(xiàn)IgG 分子50 and 25 kDa 的重鏈和輕鏈條帶。
抗體的品質(zhì)高低最終還是需要通過實驗結(jié)果來呈現(xiàn)的，但是在選擇抗體之前我們并無法準確判斷抗體的效果如何。無論什么品牌的，無論進口還是國產(chǎn)的，都會有用得不錯的產(chǎn)品，也都會有做不出來的產(chǎn)品�？贵w屬于異質(zhì)化產(chǎn)品，不同品牌之間，甚至同一品牌的不同產(chǎn)品之間，抗體品質(zhì)差異都較為明顯，而且沒有統(tǒng)一的衡量標準。這是抗體選擇中最難的一個問題。很多人習慣于根據(jù)實驗室傳統(tǒng)意識或參考文獻上使用的產(chǎn)品進行選擇，但是因為不同批次間的抗體效果也是有差異的，所以并不能完全確保正確選擇。在這種情況下，抗體的售后就尤為重要，遇到抗體品質(zhì)障礙時，能夠確保有效地解決問題，不至于影響實驗的進展�，F(xiàn)在有部分品牌可以提供免費的抗體小樣的，無疑對這個問題是一個很好的解決方案。先確定抗體是否適合自己的實驗，可以避免因為抗體質(zhì)量投訴耽誤實驗安排。
在價格方面，需要謹記，最貴的不一定就是最好的，最適合你的實驗的才是最好的。花很多錢買到很貴的抗體，再花上很長的時間去投訴的情況并不少見。只買對的，不買貴的。在選擇價格的時候還要注意規(guī)格大小、抗體濃度、效價范圍等，要綜合考慮。在規(guī)格方面，根據(jù)最終可以稀釋成的工作液的量的來衡量更為準確。很多老品牌提供的抗體產(chǎn)品基本都是以大包裝為主，就單個課題的實驗而言，過大的包裝有時會造成很大的浪費。目前Proteintech、Bioworld、Cell Signal等品牌都相繼推出小包裝的抗體，這在一定程度上給選擇者更大的選擇自由度，可以根據(jù)使用產(chǎn)品的效價，計算出自己實際需要的抗體量，做到精確定量采購。
